Sevage试剂指的是什么?主要作用是什么?一般加入量是多少?
Sevage试剂定义 Sevage试剂是一种用于脱除生物大分子溶液中蛋白质的试剂,由氯仿和正丁醇按一定比例混合而成, 常见的体积比为4∶1 、 5∶1或3∶1等。
主要作用 其主要作用是去除蛋白质杂质。
在提取多糖、核酸等生物大分子时,样品中往往含有较多蛋白质杂质,这些蛋白质会干扰后续对生物大分子的研究、分析及应用。
Sevage试剂利用蛋白质在氯仿和正丁醇混合体系中的不溶性,使蛋白质变性并沉淀出来,从而实现与目标生物大分子的分离,达到纯化生物大分子的目的。
具体原理是:氯仿对蛋白质具有较强的变性作用,可破坏蛋白质的空间结构使其凝聚;正丁醇则有助于降低表面张力,使蛋白质更好地沉淀析出,并促进两相分层,便于后续操作。
一般加入量 Sevage试剂的加入量通常根据样品中蛋白质的含量以及样品溶液的体积来确定,没有固定的绝对用量。
一般来说,Sevage试剂与待处理样品溶液的体积比在1∶3至1∶5之间较为常用 。
例如,如果有10 mL的样品溶液,可能会加入2 - 3.3 mL左右的Sevage试剂。
不过在实际操作中,需要通过多次试验进行优化,观察蛋白质沉淀效果以及目标生物大分子的损失情况等,以确定最适合特定样品的Sevage试剂加入量。
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