大肠埃希菌转化实验中,出现卫星菌落的原因可能有()
在大肠埃希菌转化实验中,出现卫星菌落的原因主要是抗生素的扩散和质粒赋予的抗性不均一,具体如下: 抗生素浓度梯度扩散: 在含有抗生素的平板培养基上,靠近涂布有含抗生素抗性基因质粒转化菌的区域,抗生素因被具有抗性的转化菌分解代谢而浓度降低。
离接种区域越远,抗生素浓度相对较高。
在平板培养过程中,抗生素会从高浓度区域向低浓度区域扩散。
那些原本没有获得质粒从而不具备抗生素抗性的野生型大肠埃希菌,在低抗生素浓度区域(即距离接种处较远但抗生素扩散后浓度降低到一定程度的地方),由于局部环境中抗生素浓度不足以完全抑制其生长,就有可能生长形成微小的菌落,即卫星菌落 。
质粒丢失或表达不稳定:部分转化成功的细菌在传代过程中可能会丢失质粒,或者虽然携带质粒但由于某些原因(如培养条件变化、基因表达调控异常等),导致抗生素抗性基因表达水平下降,使其对抗生素的耐受性降低。
这些细菌在平板上生长时,周围环境中的抗生素对它们的抑制作用相对增强,生长速度减慢。
而周围敏感菌(未转化成功的菌)在低浓度抗生素环境下,原本受抑制的生长得到一定程度的恢复,就围绕在这些生长受抑制的转化菌周围形成卫星菌落。
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