什么是RACE技术,名词解释定义是?
RACE技术即cDNA末端快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA Ends) ,是一种基于PCR技术,用于快速克隆已知部分cDNA序列两端未知序列,从而获得完整cDNA全长的方法。
原理 它主要依据已知的mRNA内部部分序列信息,通过在mRNA的3'端或5'端添加特定的寡核苷酸接头,再利用与已知序列互补的特异性引物和与接头互补的通用引物进行PCR扩增,从而将mRNA两端的未知序列扩增出来。
分类 3'-RACE:主要用于扩增mRNA的3'末端序列。
首先以mRNA为模板,用含有oligo(dT)和特定接头序列的引物进行反转录合成第一链cDNA;然后以这条cDNA为模板,使用基因特异性引物和与接头互补的通用引物进行PCR扩增,就能得到包含3'非翻译区和编码区部分序列的cDNA片段。
5'-RACE:用于扩增mRNA的5'末端序列。
由于5'端不像3'端有天然的polyA尾可以直接作为引物结合位点,所以操作相对复杂。
通常先利用反转录酶合成第一链cDNA,接着用末端脱氧核苷酸转移酶在cDNA的3'端加上一段polyA尾,之后再像3'-RACE那样,用基因特异性引物和与加尾后的序列互补的通用引物进行PCR扩增,从而获得5'端的序列 。
应用 在基因克隆、基因表达调控研究、新基因发现等方面具有重要作用,帮助科研人员获取完整的基因编码区序列,进一步深入了解基因的结构和功能 。
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